W pierwszej kolejności będzie to Masyaf. Miejsce dobrze znane z pierwszej części, będące dawniej siedzibą skrytobójców, obecnie okupowane przez Templariuszy. Ezio udaje się tam, by odkryć tajemnice swego przodka – Altaira.
Kapadocja to w pełni torfowe tereny, jednak w podziemiach kryją się wielkie sekrety. Bohater będzie musiał je odkryć. Niestety wędrówka nie będzie prosta. Sprawę utrudnią nie tylko zagmatwane tunele, ale także fakt, że jest to siedziba Templariuszy. Na szczęście Ezio spotka ludzi chętnych mu pomóc.
Najważniejszym miejscem będzie oczywiście Konstantynopol. Miasto podzielone zostało na cztery dzielnice – Constantin, Beyazid, Imperial i Galata. Cechuje je zróżnicowany klimat, począwszy od totalnej biedy i ubóstwa, po większe luksusy i na wielkim porcie kończąc.
Pozostaje jeszcze Rodos, lokacja przeznaczona do zabawy wieloosobowej. W szesnastym wieku wyspa została opanowana przez Zakon Rycerzy Szpitalników, którzy kompletnie zmienili jej wygląd. Zamiast zwyczajnej wysepki, odwiedzimy wielką twierdzę.
